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百迪細胞計數(shù)試劑盒（CCK8）5ml

品名：百迪細胞計數(shù)試劑盒（CCK8）5ml: 型號： A516-005

產(chǎn)品詳情
規(guī)格參數(shù)

產(chǎn)品信息

適用范圍	試劑
使用方法	一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 1. 細胞鋪板：對收集的細胞懸液進行計數(shù)，然后接種細胞； 2. 按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 5-7 個細胞濃度梯度，每組 4-6 個復(fù)孔； 3. 接種后培養(yǎng) 2-4 小時使細胞貼壁，然后每 100μL 培養(yǎng)基加 10μL（培養(yǎng)基體積的 10%） CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是試驗條件完全一致）。二、細胞活性檢測 1. 在 96 孔板中接種細胞懸液 (100μL/孔) ，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng) 24 小時； 2. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡) ； 3. 將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時； 4. 用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。三、細胞增殖-毒性檢測 1. 在 96 孔板中接種細胞懸液 (100μL/孔) ，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng) 24 小時； 2. 向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測藥物； 3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間； 4. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡)； 5. 將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時； 6. 用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。四、計算公式細胞活力（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）]×100 A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度 A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項	1. 酚紅和血清對 CCK-8 的檢測不會造成干擾，可通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。 2. 若細胞毒性非常低，加入 WST-8 顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測定時間。 3. 如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。 4. 加入藥物中如含有金屬，對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是 10mM 將會 100%抑制。 5. 不同的細胞系，加入 CCK-8 試劑后的反應(yīng)時間不同，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù) 量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。 6. 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為 1000 個/孔 (100μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2500 個/孔 (100μL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10%加入 CCK-8 溶液。 7. 建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。同時避免產(chǎn)生氣泡，否則會干擾 OD 值讀數(shù)。 8. 白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。 9. 使用 96 孔板進行檢測時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，需要注意蒸發(fā)問題，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液。 10.以下方法可以終止 CCK-8 反應(yīng) (96 孔板)：(a). 在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置 4°C 冰箱內(nèi)。(b). 每孔加 10μL 0.1M HCl 溶液。(c). 每孔加 10μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液，反應(yīng)停止后，應(yīng)在 24 小時內(nèi)測定。 11.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
聲明	僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件	4°C 避光保存 12 個月；-20°C 避光保存 24 個月。

產(chǎn)品詳情

細胞計數(shù)試劑盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）是一種基于 WST-8 在電子耦合試劑存在的情況下，被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測得的吸光值即可間接反映活細胞的數(shù)量。細胞增殖越快，則顏色越深，細胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。CCK-8 廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測。
BDBIO 細胞計數(shù)試劑盒（CCK8）僅一管已經(jīng)配制好的含有 WST-8 的 CCK-8 溶液，無須再進行任何配制操作，并且不必洗滌或收集細胞，使用便捷，加入 CCK-8 溶液顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，檢測時間更加靈活，便于找到最佳測定時間，可以用于大批量樣品的檢測。

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