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百迪超級NK細胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（2L）Kit

品名：百迪超級NK細胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（2L）Kit: 型號： S1042-KIT

產(chǎn)品詳情
規(guī)格參數(shù)

產(chǎn)品信息

適用范圍	試劑
使用方法	一、試劑配制 1. 培養(yǎng)瓶包被液：18ml PBS加入本試劑盒1支試劑Ⅰ、1支試劑Ⅱ。 2. 增殖培養(yǎng)基：每1000ml免疫細胞無血清培養(yǎng)基中加入本試劑盒1支試劑Ⅴ。 3. 活化培養(yǎng)基的配制：配制完增殖培養(yǎng)基后，取出500ml增殖培養(yǎng)基，加入本試劑盒1支試劑Ⅳ、1支活化培養(yǎng)基添加物。二、取材取材時使用一次性負壓采血管抽取自體外周血 50ml。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）或臨床獲得健康新生兒臍帶血。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）。三、NK細胞的培養(yǎng)（2L體系） 1. 培養(yǎng)前：T175培養(yǎng)瓶中加入包被液，2-8℃冰箱過夜，或置于37℃培養(yǎng)箱中至少包被2h。 2. 第0天：取出2支高效離心管，分別加入15ml樣本密度分離液，200g離心1min，確保離心后隔片下充滿分離液，隔片上有0.5-1cm高度分離液。小心將25ml抗凝血緩慢沿管壁加至分離液界面上，確保血液及分離液之間有明顯界面（每管可加15-25ml血液，若超過 25ml，則分管）。600g，離心30min（也可根據(jù)實際情況進行調(diào)節(jié)），注意慢升慢降。 3. 離心后可觀察從上至下分為4層，淡黃色血漿層，白色環(huán)狀PBMC層，分離液層，紅細胞層。用吸管吸取血漿層，做滅活處理。滅活步驟：置于水浴鍋中56℃，30min；然后-20℃靜置10min；最后800g，離心 15min，保留上清棄去沉淀，短期保存于4℃?zhèn)溆?，長期保存請置于-20℃~-80℃環(huán)境下。 4. 用吸管吸取PBMC細胞層至50ml離心管中，為盡量獲得更多細胞，建議隔片以上部分全部吸取，注意不要吸到紅細胞。在PBMC離心管中加入PBS混勻（PBS量要多于吸取的 PBMC體積），600g，離心10min。棄去上清，加入PBS復(fù)溶洗滌，300g，離心10min。分離出的PBMC用未加任何因子的免疫細胞無血清培養(yǎng)基配制成細胞懸液40ml，加入1整套試劑Ⅲ（5支全部加入），加入1支試劑Ⅸ。將上述所有液體加入到棄掉包被液的培養(yǎng) 瓶中，加入8ml自體血漿，置于飽和濕度、37℃、5.0% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注：建議接種密度為 1-3×106 個/ml，如分離后細胞數(shù)少，則相對應(yīng)減少培養(yǎng)基及血漿使用量，但是活化因子添加量不變。）注意：先使用完所有活化培養(yǎng)基，再使用增殖培養(yǎng)基。由于個體差異問題，每個樣本生長速度不一致，添加培養(yǎng)基的時間不一定要嚴(yán)格按照以下時間進行，需根據(jù)具體情況具體分析，確保細胞已經(jīng)活化成功，呈現(xiàn)聚團生長的情況，細胞數(shù)量有增殖。在補加培養(yǎng) 基后，細胞密度維持在 1×106 個/ml，有利于細胞的生長。 5. 第 3 天加入 40ml NK 活化培養(yǎng)基，加入 5ml 血漿，加入 1 支試劑Ⅸ，1 支試劑Ⅵ。 6. 第5天加入70ml NK活化培養(yǎng)基，加入5ml血漿，加入1支試劑Ⅸ，1支試劑Ⅶ。 7. 第7天將培養(yǎng)瓶中細胞完全吹打下來，輕輕搖勻瓶內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細胞密度，建議加入剩余自體血漿并補加剩余的活化培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)移到1個培養(yǎng)袋。 8. 第9天：輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細胞密度，建議培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基500ml。 9. 第12天輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml- 1ml細胞液計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細胞密度，建議培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基1000ml 。此時取樣做細菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。注：如需繼續(xù)擴增培養(yǎng)體系至4L，請購買本公司免疫細胞培養(yǎng)基1L * 2 瓶、2支Ⅴ號因子、1個 2.5L體系懸浮細胞培養(yǎng)袋。四、擴增步驟 1. 第13-15天視細胞生長狀態(tài)及細胞密度選擇適當(dāng)擴增時間，輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml- 1ml細胞液計數(shù)，無菌條件下取出袋內(nèi)一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)至一個新的培養(yǎng)袋內(nèi)。配制增殖培養(yǎng)基：每1L免疫細胞培養(yǎng)基加入1支Ⅴ號因子；建議向兩個培養(yǎng)袋內(nèi)各補加 1000ml 增殖培養(yǎng)基。 2. 第15天收集NK細胞懸液2000ml，1500rpm×5min離心后棄去上清液，250ml離心管集 2管每管生理鹽水200ml洗滌（1500rpm×8min）1次，再用50ml離心管生理鹽水100ml 洗滌（1200rpm×5min）1次，按照100ml生理鹽水+8ml 20%人血清白蛋白重懸細胞，封裝好后送病房，同時留樣封存以備日后檢測。
注意事項	1. 使用前請仔細閱讀本試劑盒說明書，并嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行操作。 2. 本試劑盒必須按規(guī)定溫度保存，不可反復(fù)凍融。試劑在使用前需解凍，并充分混勻，不可劇烈震蕩。 3. 可視細胞生長的實際狀況適當(dāng)調(diào)整補液時間和用量。
聲明	僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件	根據(jù)說明書內(nèi)容，有效期12個月。

產(chǎn)品詳情

超級 NK 細胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（2L）是一款專為 NK 細胞培養(yǎng)而設(shè)計的無血清、無異源動物成分的擴增培養(yǎng)試劑盒，產(chǎn)品性能高，質(zhì)量穩(wěn)定，適用血液類型范圍廣。超級 NK 細胞培養(yǎng)方案將血液中內(nèi)源性的 CD34+細胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為 NK 細胞，且可抑制 T 細胞的增殖，因此本款細胞因子試劑盒培養(yǎng)后 NK 純度（CD3-CD16+CD56+）更高，新鮮臍帶血、外周血來源培養(yǎng)后 NK 純度穩(wěn)定在 95%以上，凍存細胞培養(yǎng)后 NK 純度穩(wěn)定在 85%以上。

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