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      產(chǎn)品目錄
      
                    
                
      
                
      
                    
      
                        
      百迪超級NK細胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（6L）Kit
      
                        
                    
      
                    
      
                        
      
                            
      
                            
      
                                
       
      品名： 百迪超級NK細胞無血清培養(yǎng)試劑套裝（6L）Kit
      
                                                                        
      型號： S1045-KIT
      
                                    
                                
      
                            
      
                        
      
                        
      
                            
        
                                
      • 產(chǎn)品詳情
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      • 規(guī)格參數(shù)
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      產(chǎn)品信息
      適用范圍試劑
      使用方法一、試劑配制
      1. 培養(yǎng)瓶包被液：18ml PBS加入本試劑盒1支試劑Ⅰ、1支試劑Ⅱ。
      2. 增殖培養(yǎng)基：每1000ml免疫細胞無血清培養(yǎng)基中加入本試劑盒1支試劑Ⅴ。
      3. 活化培養(yǎng)基的配制：配制完增殖培養(yǎng)基后，取出500ml增殖培養(yǎng)基，加入本試劑盒1支試 劑Ⅳ、1支活化培養(yǎng)基添加物。
      二、取材
      取材時使用一次性負壓采血管抽取自體外周血 50ml。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑） 或臨床獲得健康新生兒臍帶血。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）。
      三、NK細胞的培養(yǎng)
      1. 培養(yǎng)前：T175 培養(yǎng)瓶中加入包被液，2-8℃冰箱過夜，或置于 37℃培養(yǎng)箱中至少包被 2h。
      2. 第0天：取出2支高效離心管，分別加入15ml樣本密度分離液，200g離心1min，確保離 心后隔片下充滿分離液，隔片上有0.5-1cm高度分離液。小心將25ml抗凝血緩慢沿管壁 加至分離液界面上，確保血液及分離液之間有明顯界面（每管可加15-25ml血液，若超過 25ml，則分管）。600g，離心30min（也可根據(jù)實際情況進行調(diào)節(jié)），注意慢升慢降。
      3. 離心后可觀察從上至下分為4層，淡黃色血漿層，白色環(huán)狀PBMC層，分離液層，紅細胞 層。用吸管吸取血漿層，做滅活處理。
      滅活步驟：置于水浴鍋中56℃，30min；然后-20℃靜置10min；最后800g，離心 15min，保留上清棄去沉淀，短期保存于4℃?zhèn)溆茫L期保存請置于-20℃~-80℃環(huán)境下。
      4. 用吸管吸取 PBMC 細胞層至 50ml 離心管中，為盡量獲得更多細胞，建議隔片以上部分 全部吸取，注意不要吸到紅細胞。在 PBMC 離心管中加入 PBS 混勻（PBS 量要多于吸取 的 PBMC 體積），600g，離心 10min。棄去上清，加入 PBS 復溶洗滌，300g，離心 10min。
      5. 分離出的 PBMC 用未加任何因子的免疫細胞無血清培養(yǎng)基配制成細胞懸液 40ml，加入 1 整套試劑Ⅲ（5 支全部加入），加入 1 支試劑Ⅸ。將上述所有液體加入到棄掉包被液的培 養(yǎng)瓶中，加入 8ml 自體血漿，置于飽和濕度、37℃、5.0% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注：建 議接種密度為 1-3×106 個/ml，如分離后細胞數(shù)少，則相對應減少培養(yǎng)基及血漿使用量， 但是活化因子添加量不變。）
      注意：先使用完所有活化培養(yǎng)基，再使用增殖培養(yǎng)基。由于個體差異問題，每個樣本生長 速度不一致，添加培養(yǎng)基的時間不一定要嚴格按照以下時間進行，需根據(jù)具體情況具體分 析， 確保細胞已經(jīng)活化成功，呈現(xiàn)聚團生長的情況，細胞數(shù)量有增殖。在補加培養(yǎng)基后， 細胞密 度維持在 1×106 個/ml，有利于細胞的生長。
      6. 第 3 天加入 40ml NK 活化培養(yǎng)基，加入 5ml 血漿，加入 1 支試劑Ⅸ，1 支試劑Ⅵ。
      7. 第5天加入70ml NK活化培養(yǎng)基，加入5ml血漿，加入1支試劑Ⅸ，1支試劑Ⅶ。
      8. 第7天將培養(yǎng)瓶中細胞完全吹打下來，輕輕搖勻瓶內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液 計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細胞密度，建議加入剩余自體血漿并補加剩余的活化培養(yǎng)基。轉 移到1個培養(yǎng)袋。
      9. 第9天：輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細胞 密度，建議培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基500ml。
      10.第11-12天輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液計數(shù)，視細胞生長狀態(tài)及細 胞密度，建議培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基1000ml 。（細胞總量達到20億時進行此項操作）
      11.第13-15天輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細胞液計數(shù)，細胞總量達到30億時， 建議培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基1000ml。此時取樣做細菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。
      12.第15-18天輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml 細胞液計數(shù)，細胞總量達到60 億 時，將1500ml培養(yǎng)液轉移至一個新的3L培養(yǎng)袋中，建議每個培養(yǎng)袋補加增殖培養(yǎng)基1500 ml。此時取樣做細菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。
      13.第18-21天，收集NK細胞懸液6000ml，1500rpm×5min離心后棄去上清液，250ml離 心管集2管每管生理鹽水200ml洗滌（ 1500rpm×8min ）1次 ，再用50ml離心管生理 鹽水 100ml洗滌（1200rpm×5min ）1次，按照100ml生理鹽水+ 8ml 20%人血清白 蛋白重懸細胞，封裝好后備用，同時留樣封存以備日后檢測。
      注：分批收獲細胞：擴袋培養(yǎng)時，可收獲一部分的細胞，剩余的部分繼續(xù)補加增殖培養(yǎng)基 進行擴增（原則為按照細胞密度補液），客戶可按照方案分批收集或一次性收集。
      注意事項1. 使用前請仔細閱讀本試劑盒說明書，并嚴格按照說明書執(zhí)行操作。
      2. 本試劑盒必須按規(guī)定溫度保存，不可反復凍融。試劑在使用前需解凍，并充分混勻，不 可劇烈震蕩。
      3. 可視細胞生長的實際狀況適當調(diào)整補液時間和用量。
      聲明僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
      保存條件根據(jù)說明書內(nèi)容，有效期12個月。

      
                                
      暫無內(nèi)容...
      
                            
      
                        
      
                    
      
                
      
            
      
            



        
      
    


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